تشخیص ژنوتایپ ‏HPV‏ با روش مولکولی (ریورس بلات)‏‎ EXTRA

جهت مشاهده تصویر بزرگتر بر روی تصویر زیر کلیک کنید
76
تعداد بازدید: 1672

مراحل انجام آزمایش • پردازش نمونه ‏‎–‎‏ تکثیر به روش ‏PCR • مراحل تست ‏1.‏ هیدریدیزاسیون 60 دقیقه ‏2.‏ شستشو 30 دقیقه ‏3.‏ بررسی کالریمتزیک 60 دقیقه شش واقعیت در مورد ویروس پاپیلومای انسانی ‏HPV‏:‏ ‏1.‏ سرطان رحم در اثر عفونت با ویروس پاپیلومای انسانی ‏HPV‏ ایجاد می¬شود.‏ ‏2.‏ خطر ابتلا به سرطان رحم با ژنوتایپ های ویروس پاپیلومای انسانی و پایداری آن ارتباط دارد.‏ ‏3.‏ زنوتیپ¬های 16 و 18 مخصوصا با احتمال سرطان رحم در ارتباط می¬باشند.‏ ‏4.‏ تقریباً 30 درصد از سرطان های دهانه رحم با ژنوتایپ هایی به غیر از 16 و 18 در ارتباط هستند.‏ ‏5.‏ انتشار جغرافیایی ژنوتایپ های ‏HPV‏ به صورت یکپارچه نیست.‏ ‏6.‏ واکسن های رایج برای این عفونت تنها علیه ژنوتایپ های 16 و 18 حفاظت بخش هستند.‏ TYPE TIME = RISK

توضیحات فنی

    ‏1.‏ هیدریدیزاسیون 60 دقیقه
    ‏2.‏ شستشو 30 دقیقه
    ‏3.‏ بررسی کالریمتزیک 60 دقیقه

اطلاعات شرکت

امرافر emrafar
شرکت - عادی (در انتظار عضویت)
موقعیت روی نقشه
ایران
تهران
 

برخی از محصولات این شرکت

توضیحات
به طور کلی در ژنتیک مولکولی به عمل انتقال مولکولهای تفکیک شده در الکتروفورز از ژل به روی یک غشاء ویژه، بلاتینگ یا بلات کردن گفته می‌شود. معنای واژهٔ انگلیسی بلاتینگ، لکه‌گذاری است. برای انجام اعمالی مانند هیبریداسیون اسیدهای نوکلئیک و شناسایی پروتئینها با پادتن‌ها، ژل محیط مناسبی نیست. علت اصلی این مسئله نفوذپذیری کم ژل و خروج شناساگرها (Probe) از ژل می‌باشد. از اینرو در صورت انجام عمل آشکارسازی به کندی و با مشکل صورت می‌گیرد. اما غشاء، محیط مناسبی برای اعمال فوق فراهم می‌کند. سادرن بلاتینگ برای انتقال مولکولهای DNA از ژل به غشاء از روشی استفاده می‌شود که سادرن بلاتینگ نام دارد (در فارسی اشتباهاً ساترن بلاتینگ هم نوشته شده). این روش ابتدا توسط ادوین سادرن از دانشگاه آکسفورد ابداع شد. در این روش از خاصیت موئینگی، برای انتقال مولکولهای DNA استفاده می‌شود. اصول این روش به این صورت است که پس از تفکیک مولکولها بر روی ژل، آن را در محلول هیدرو کسید سدیم قرار داده تا مولکولهای DNA دو رشته‌ای واسرشت شوند. درصورتیکه که ژل حاوی مواد واسرشت کننده باشد نیازی به این مرحله نیست. سپس ژل برروی سکویی که دریک ظرف حاوی بافر قرار دارد، منتقل نموده و بر روی آن غشاء نیتروسلولز قرار می‌دهند. بر روی غشاء مزبور چندین لایه کاغذ نمگیر قرار داده می‌شود. این لایه‌ها باعث برقراری جریان بافر به سمت بالا می‌شود از ژل به غشا می‌شوند. همراه با جریان بافر، مولکولهای DNA از ژل خارج شده و بر روی غشاء نیتروسلولزی یا نایلونی قرار می‌گیرند. غشاء هائی که برای این منظور به کار گرفته می‌شوند کاملاً اختصاصی بوده ودارای بار الکتریکی مثبت می‌باشند، در نتیجه مولکولهای اسید نوکلئیک به طور محکم به انها متصل می‌شوند. از سادرن بلاتینگ برای شناسایی جایگاه یک ژن در کل ژنوم و تعین تعداد مولکول ترانس‌ژن نیز استفاده می‌شود نوردرن بلاتینگ از آنجا که RNA به سختی به کاغذهای نیتروسلولزی متصل می‌شود، از روش سادرن نمی‌توان برای مولکولهای RNA استتفاده کرد. برای انتقال مولکولهای RNA از روشی بنام نوردرن بلاتینگ استفاده می‌شود. اساس این روش مشابه روش سادرن بلاتینگ است. با این تفاوت که در آن از کاغذهای فعال شده یا کاغذهای DBM، استفاده می‌شود. این کاغذها را می‌توان به راحتی با تیمارهای شیمیایی خاصی از کاغذ صافی تهیه کرد. در این روش، به علت تک رشته‌ای بودن RNA و تفکیک آن بر روی ژل واسرشت کننده نیازی به مرحله مجاورت با هیدرکسید سدیم نمی‌باشد. در ضمن به علت حساس بودن مولکولهای RNA دقت بیشتری در انجام مراحل لازم می‌باشد. وسترن بلاتینگ برای انتقال پروتئینهای تفکیک شده بر روی ژل به غشاء از تکنیک وسترن بلاتینگ استفاده می‌شود. این روش نیز مشابه روش سادرن بلاتینگ می‌باشد با این تفاوت که جریان بافر به صورت افقی است. اخیرا روشهای بلاتینگ جدیدی از ترکیب روشهای بالا ابداع شده‌اند. از جمله این روشها روش بلاتینگ جنوب غربی و بلاتینگ شمال غربی را می‌توان نام برد. روش اول برای انتقال پروتئینهایی که به DNA متصل می‌شوند استفاده می‌شود و روش دوم برای پروتئینهایی که به RNA متصل می‌شوند، به کار گرفته می‌شود.
ویدئوهای مرتبط


نظرات بیندگان
نظر شما
نام و نام خانوادگی :
ایمیل :
سوال یا نظر شما : ( لطفا اطلاعات تماس خود را وارد کنید) :

خانه چاپ ارسال به دوستان نسخه متنی کوچک کردن متن بزرگ کردن متن دانلود خروجی پی دی اف خروجی میکروسافت ورد
تعداد بازدید : 1672
0/10 (تعداد آرا 0 نفر )