روش ­های آنزیم ضد آنزیم (Enzyme – antienzume techniques)

روش­ های آنزیم ضد آنزیم       (Enzyme – antienzume techniques)

در این روش­ها آنتی ­بادی با آنزیم کنژوگه نمی­شود بلکه از آنتی­ بادی علیه آنزیم استفاده می­شود تا پلی­بین

آنتی ­بادی اولیه و آنزیم بسازیم. به این طریق دیگر به کنژوگه کردن آنتی­­ بادی با آنزیم نیازی نیست،

فرآیندی که علاوه بر اینکه از نقطه نظر تکنیکی مشکل است در عین حال تمایل اتصال آنتی­بادی به آنتی­ژن ر

ا کاهش می­دهد.

این تکنیک برای اولین بار توسط استرنبرگر و همکارانش در سال ۱۹۷۰ معرفی شد.

وی از سیستم Peroxidase antiperoxidase که به اختصار PAP نامیده می­شود استفاده کرد.

در این روش کمپلکس PAP که در مرحله­ی سوم استفاده می­شود شامل کمپلکس پایدار محلول آنتی ­بادی بر علیه Horseradish Peroxidase و آنتی­ژن Horseradish Peroxidase است.

این کمپلکس حلقوی شامل دو ملکول آنتی­بادی و سه ملکول Horseradish Preoxidase است.

در این روش آنتی­بادی اولیه که علیه آنتی­ژن مورد نظر است توسط قسمت Fab خود  به آنتی­ژن در برش بافتی

متصل می­شود؛ سپس آنتی­بادی ثانویه به آن اتصال پیدا کرده و این آنتی­بادی کمپلکس PAP متصل می­شود.

آنتی­بادی اولیه و آنتی­بادی­های ضد horseradish باید از منشأ گونه­ی مشابه باشند. به این ترتیب آنتی­بادی  ثانویه

که از منشأ گونه­ی دیگری است می­تواند جزء ثابت هر آنتی­بادی اختصاصی باشد.

در روش PAP پراکسیداز آندروژن باید ابتدا توسط هیدروژن پراکسیداز یا مخلوطی از متانول و هیدروژن پراکسیداز

مهار شود.

اتصالات غیراختصاصی در مرحله­ی بعد توسط سرم رقیق شده از منشأ گونه­ای که آنتی­بادی ثانویه از آن گونه

تهیه شده مهار می­شود.

سپس آنتی­بادی ثانویه به مقدار زیاد بر روی برش ریخته می­شود تا محل­های آنتی­ژنی آزاد برای اتصال کمپلکس

PAP باقی بماند.

آنتی­بادی ثانویه باید با حزئیات آنتی­بادی اولیه و آنتی­بادی­های کمپلکس با PAP واکنش کند.

باند نشده توسط شستشو قبل از ریختن کمپلکس PAP حذف می­شود.

مرحله­ی آخر واکنش، کمپلکس PAP با سوبسترا و کروموژن و تشکیل محصول رنگی، توسط میکروسکپ ن

وری قابل رؤیت است که محل استقرار آنتی­ژن را در بافت مشخص می­کند.

0/5 ( 0 بازدید )

محصولات مرتبط

بازدید: 1

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *


دانلود اپلیکیشن اندروید پارامد پارامد-اپلیکیشن رد کردن