روش های تهیه کشت

روش های تهیه کشت

۱- روش تهیه کشت روی لام :
وسایل لازم: پلیت٬ لوله خمیده یوئی شکل٬ لام و لامل٬‌محیط کشت (S)٬ پنس و بیستوری
روش کار: ml۱۵ از محیط کشت آگار مذاب را درون پلیت استریل می ریزیم.

بعد از سرد شدن بلافاصله بوسیله بیستوری آن را به قطعات چهارگوش یک سانتیمتری می بریم.

درون پلیت حاوی لوله یوئی شکل که لامی روی آن قرار گرفته٬ بر روی لام یک قسمت از آگار چهار گوشه را قرار می دهیم.

چهار ضلع آگار را توسط پنس استریل با تکه های کوچک کلنی قارچ مورد نظر٬ تلقیح می نماییم. لاملی که قبلاً

استریل شده است را روی آگار موجود در روی لام می گذاریم. سپس درب پلیت را بسته البته قبل از آن ۸-۷ میلی

لیتر آب مقطر استریل درون پلیت می ریزیم٬ تا برودت لازم جهت رشد قارچ تامین گردد٬

( میتوان گلیسیرین استریل ۱۰٪ نیز استفاده کرد) کلیه مراحل فوق بایستی کنار شعله انجام شود.

هرگاه رشد قارچ به حد دلخواه برسد (کلنی تا لبه های لامل رشد کند) دو نمونه می توان از این اسلاید کالچر تهیه کرد.

الف: نمونه تهیه شده از لامل Cover: بوسیله پنسی لامل را که در اطراف آن کلنی قارچ رشد نموده به آرامی از

سطح ژلوز بر می داریم این لامل را بر سطح لام تمیز حاوی یک قطره LCB می گذاریم و بررسی می کنیم.
ب: نمونه تهیه شده از لام slide: ژلوز موجود در سطح لام را برداشته٬ داخل پلیت می اندازیم و لام را از درون پلیت

خارج می کنیم. قطره ای LCB در محل رشد کلنی قارچ در اطراف ژلوز می ریزیم و لاملی بر روی آن قرار می دهیم.

نمونه ای که از لامل تهیه می شود با علامت (c) و نمونه ای که از لام تهیه می گردد با علامت (s) مشخص می شود.
سیل کردن to seal: اضلاع لامل را با لاک ناخن یا هر ماده مشابهی می توان مسدود ساخت و برای مدتها

نگهداری نمود. معمولاً از لاک بی رنگ که دارای ماده انتالان است٬ استفاده می شود.

از لاکهای معمولی و حتی رنگی هم می توان استفاده کرد.

می توان از چسب سیتولوژی یا بندوکانادا نیز استفاده کرد. قبل از مسدود نمودن باید مواد رنگی اضافی را با کاغذ

خشک کن از اطراف لامل کاملاً پاک نمود.
۲- روش تهیه کشت در لوله : بعد از تهیه محیط کشت و انتخاب محیط مناسب توسط آنس از کلنی قارچ به

درون لوله می بریم.

آنس قارچ شناسی سرکج است. زیرا کار با قارچ٬ بصورت نشاکاری است. کمترین جای کشت در لوله٬ ۳/۱ وسط

محیط است که ۴-۳ بار آنس را وارد محیط در این مناطق می کنیم.
۳- روش کشت سه خطی در پلیت برای تولید کلامیدوکونیدی در کاندیداآلبیکنس: این عمل روی محیط کشت کورن

میل آگار +۱٪ توئین ۸۰ انجام می شود. آنس را کاملاً داغ کرده٬‌سه عدد شیار نزدیک به هم و موازی به طوری که به

ته پلیت برخورد نکند می دهیم. طول شیارها mm۲۲ (mm۴ بیشتر از لامل)

و فاصله شیارها از هم mm۳ است سپس توسط آنس از سوش کاندیدا مقدار کمی بین شیارها قرار می دهیم٬

لامل را استریل کرده و روی شیارها قرار می دهیم. اطراف پلیت را با نوار چسب پوشانده و تا مدت سه روز در

حرارت اتاق نگهداری می کنیم.
از هر پلیت جهت کشت چهار نمونه مخمر مشکوک میتوان استفاده کرد. برای بررسی نیز٬ لامل را بر روی لام حاوی

یک قطره LCB قرار داده و بررسی می کنیم. ( میتوان بلاستوسپور٬‌کلامیدوسپور و پسودومیلیوم را مشاهده کرد).

یا می توان قسمتی از ژلوز حاوی قارچ را با اسکالپل روی لام گذاشته و یک قطره سرم فیزیولوژی روی آن می گذاریم

بعد آن را روی شعله آنقدر حرارت می دهیم تا ژلوز آب شود بعد رنگ آمیزی گرم می کنیم که قارچ ها٬‌gr+مشاهده

می شوند.
عفونت های قارچی سطحی
عفونتهای قارچی سطحی ضایعاتی هستند که به قسمت شاخی پوست و بخشی از ساقه مو آسیب می رسانند

و معمولا لکه هایی در روی پوست با شوره های بسیار ریزی در سطح پوست ایجاد می کنند و در حمله به مو

ارگانیسم فقط به قسمتهای سطحی مو آسیب می رساند و در نهایت آسیب حاصله از آنها در بافت بسیار ناچیز

بوده و بیشتر از جنبه زیبایی مورد توجه قرار می گیرند.

0/5 ( 0 بازدید )

بازدید: 1

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *


دانلود اپلیکیشن اندروید پارامد پارامد-اپلیکیشن رد کردن