آنتی بادی ضد ویروس روبلا (  IgM)

  • آنتی بادی ضد ویروس روبلا ( IgM)

Anti Rubella virus – Antibody ( IgM)

نام آنالیت: آنتی بادی ضد ویروس روبلا (  IgM)

ساختمان و متابولیسم: ویروس سرخجه از طریق خون در زنان باردار از پلاسنتا یا

جفت عبور کرده و سبب  مرگ جنین یا بروز ناهنجاری­های مادر زادی نظیر کاتاراکت

، نقص­های شریانی در سیستم قلبی عروقی،اسپلنومگالی و میکروسفالی می­شود.

حضور IgM اختصاصی ضد سرخجه در زمان تولد دلیل بر عفونت داخل رحمی با ویروس سرخجه می باشد. آنتی بادی IgM, 5-4 هفته پایدار می­باشد.

معرفی آزمایش، کاربرد بالینی: تیتر آنتی بادی  IgM در نوزادان در تشخیص عفونت

سرخجه مادر زادی به کار می رود.

اندازه گیری آنتی بادی IgM اختصاصی برای تشخیص زودرس عفونت حاد ضروری می­باشد .

اساس روش متداول:EIA ( به ویروس  Capture ساندویچ غیر رقابتی)

( اختصاصی سرخجه IgM).

روش مرجع:CFT

روش ارجح: EIA( ELISA)

روش های دیگر:HI,SRIA

نوع نمونه قابل اندازه گیری: در نمونه­های سرم یا پلاسما انجام می­شود. به مدت

1 هفته در دمای 8-2 درجه سانتیگراد پایدار است و برای مدت طولانی تر در 20- درجه فریز می­شود

واکنش تداخلی: نمونه های شدیدا همولیز و لیمیک در آزمایش ایجاد تداخل می کند،

نمونه­های پلاسمایی ممکن است دارای فیلامانهای فیبرین باشد که در آزمایش تداخل

ایجاد می کند. لذا بهتر است حتی الامکان از پلاسما استفاده نشود .

معایب و فواید روش حاضر: روش EIA ازویژگی و حساسیت بالایی برخوردار است .

در کیتهای تجارتی EIA از جطء Fab آنتی بادی ( Fragment) استفاده شده است تا

عوامل تداخلی نظیر فاکتور روماتوئید در این روش حذف شوند.

محدوده طبیعی:

Non reactive (بر اساس cut off تعیین شده کیت)

روبلا- NCCLS

ویروس روبلا ویروسی از خانواده توگا ویریده است که عامل بیماری سرخجه یا سرخک آلمانی می باشد, ویروس از فردی به فرد دیگر منتقل می شود و بسیار عفونی است .

بطور مشخص تب خفیف, سردرد, التهاب ملتحمه, بزرگی عقده های لنفاوی و راش

جلدی از علائم سرخجه هستند که این علائم تا قبل از شروع برنامه واکسیناسیون در کودکان و بالغین جوان شایع بود .

خطرناک ترین عارضه روبلا عفونت خانم­ های باردار است، بویژه اگر این عفونت در سه

ماهه اول بارداری افتاده بیافتد.

عفونت در مادران نامشخص است، اما در طی ورود این ویروس به جریان خون مادر،

ویروس از جفت عبور کرده و در جنین تکثیر می­یابد و منجر به عفونت منتشره در جنین و ناهنجاری­های متعدد از جمله اختلال قلب، چشم، گوش، طحال،کبد و مغز می­شود.

اگر عفونت در سه ماه اول بارداری اتفاق بیافتد 50-30 درصد احتمال دارد که جنین دچار ناهنجاری شود، اگر عفونت در سه ماهه دوم اتفاق بیافتد 25-22 درصد و اگر عفونت

در سه ماه سوم اتفاق بیافتد این احتمال به 8-6 درصد کاهش می­یابد.

تشخیص سرولوژیک بر پایه وجود آنتی بادی اختصاصی علیه روبلا در سرم جهت

تشخیص عفونت در مادر و نوزاد و یا با هدف تعیین سطح ایمنی مادر نسبت به ویروس

روبلا انجام می­شود.

اگر مادر واکسن تزریق کرده باشد سطح IgM اختصاصی در سرم بالا بوده و نشانه

مصونیت مادر است.

وجود IgM اختصاصی در سرم مادر می­تواند نشانه عفونت اخیر باشد و باید پیگیری شود. وجود IgM اختصاصی در سرم نوزادان نشانه عفونت داخل رحمی است،

اما در بعضی از موارد روبلای مادرزادی ممکن است IgM به طور مداوم قابل تشخیص

باشد و در این موارد تست IgM مثبت نمی تواند نشانه عفونت اخیر باشد .

آزمایش مرجع: به دلیل اینکه آنتی بادی ضد روبلا توسط روش­ های متفاوتی تشخیص

داده می­شود

تصمیم برای انتخاب یک روش مرجع مشکل است، اما امروزه با پیشرفت روش­های الایزا برای تشخیص, الیزا به عنوان یک روش معتبر شناخته شده است.

روش­های دیگر: تست آگلوتیناسیون پاسیو و مهار هماگلوتیناسیون که قابلیت

تشخیص آنتی بادی از کلاس IgG   و  IgMرا دارد ولی قابلیت افتراق این دو را ندارد. حساسیت تست مهار هماگلوتیناسیون معادل تست الایزا است.

ایمونوفلورسانس غیر مستقیم: در این روش آنتی ژن روبلا بر روی اسلاید فیکس شده است و بعد از افزودن سرم بیمار وانکوبایسون بعد از مرحله شستشو آنتی هیومن کنژوگه که به اسلاید اضافه می­شود و اسلاید برای بررسی وجود فلورسانس با میکروسکوپ فلورسانس مشاهده می­شود.

* تست خنثی سازی ویروس: پس از مجاور کردن سوسپانسیون ویروس با سرم بیمار

این مخلوط به محیط کشت ویروس تلقیح می­شود و بعد از گدشت زمان مورد نیاز برای کشت ویروس٬ کشت سلولی برای وجود اثرات سیتوپاتیک مورد بررسی قرار می­گیرد.

* تست فیکساسیون کمپلمان: این تست شامل دو مرحله است. در مرحله اول آنتی

ژن روبلا با سرم بیمار مجاور می­شود و بعد از زمان انکوباسیون به این سیستم گلبول قرمز حساس شده با آنتی بادی روبلا اضافه می­شود.

در صورت وجود آنتی بادی اختصاصی علیه روبلا در سرم این آنتی بادی به آنتی ژن

باتد شده و کمپلمان را فیکس می­کند. در مرحله دوم که گلبول حساس شده با

آنتی بادی اضافه می­شود در فقدان کمپلمان سالم می­ماند.

بنابراین عدم همولیز نشانه وجود آنتی بادی اختصاصی در سرم است.

در صورتی که آنتی بادی وجود نداشته باشد کمپلمان نیز فیکس نشده و در مرحله

دوم کمپلمان باعث همولیز گلبول می­شود.

* روش lgM immune capture hemagglutination با حساسیت و ویژگی معادل الیزا: در این تست سرم بیمار به چاهک­های پوشیده شده از آنتی هیومن lgM اضافه می­شود

و بعد از به دام افتادن lgM موجود در سرم شستشو انجام شده و به چاهک­ها٬ گلبول قرمز حساس شده با آنتی ژن روبلا اضافه می­شود و هماگلوتینایسون مشاهده می­شود.

* تست ELISA  که گسترده ترین تست در تشخیص روبلا است و با کاربرد آنتی ژن­های متعدد در تست الیزا این روش به یک روش تشخیصی دقیق٬ حساس و معتبر تبدیل شده است متداول­ترین روش ELISA متد indirect ELISA: سرم رقیق شده بیمار به چاهک پوشیده شده از آنتی ژن­های خالص روبلا اضافه شده و پس از سپری شدن زمان انکوباسیون در اولین مرحله شستشو سایر مواد باقیمانده  سرم خارج می­شود.

برای تشخیص آنتی بادی اختصاصی اتصال یافته به آنتی ژن­های موجود در چاهک از انتی هیومن lgM, lgG (بسته به نوع آنتی بادی مورد نظر جهت سنجش) استفاده می­شود

که با آنزیم پراکسیداز کونژوگه شده است.

پس از زمان انکوباسیون و شستشو مرحله دوم آنتی بادی کنژوگه اضافی نیز خارج

می­شود٬ سپس با افرودن کروموژن که سوبسترای آنزیم پراکسیداز است رنگی پدید می ­آید

که در مرحله بعدی این واکنش توسط محلول متوقف کننده ختم می­شود٬ شدت رنگ متناسب با مقدار آنتی بادی موجود در سرم است.

همانطور که ذکر گردیده در بررسی­های انجام شده٬ پس از افزایش تیتر lgM در عفونت

اولیه تیتر آن پایدار مانده و به نظر می­رسد که اندازه گیری lgM اندکس مناسبی جهت تشخیص بیماری حاد اولیه نمی­باشد٬

لذا جهت تشخیص بیماری حاد تست lgG avaidity پیشنهاد گردیده است٬ در عفونت­ های حاد و اخیر lgG دارای avidity کم و در عفونت مزمن و گذشته دارای avidity زیاد برای

اتصال به آنتی ژن است٬ در تست lgG avidity رقت­های متوالی از سرم یک بار در بافر رقیق کننده معمولی و یک بار در بافر رقیق کننده حاوی اوره تهیه شده و پس از قرائت نتایج منحنی

برای هر دو رسم می­شود و با محاسبه اندکس avidity نتایج گزارش می­گردد.

قابل ذکر است که جهت سنجش lgM به جهت احتمال وجود فاکتورهای مداخله گر نظیر فاکتور روماتوئید و یا تیتر بالای lgG تست inditect ELISA دارای ارزش بالایی نمی­باشد

و می­تواند دارای نتایج مثبت و یا منفی کاذب باشد٬ جهت رفع این اشکال یا از مواد

خنثی کننده فاکتورهای مداخله گر استفاده می­شود.

(Neutralizing reagents) و یا از تست capture ELISA استفاده می­گردد٬

در این تست سرم رقیق شده بیمار به چاهک­های پوشیده شده با آنتی بادی ضد lgM انسانی اضافه می­گردد٬ پس از انکوباسیون lgM های موجود در سرم توسط آنتی بادی

کف چاهک­ها به دام می­افتند و پس از شستشو با اضافه نمون آنتی بادی کف چاهک­ها به دام می­افتند

و پس از شستشو با اضافه نمودن آنتی ژن روبلای کنژوگه شده با آنزیم در صورت

وجود lgM ضد روبلا این آنتی ژن­ها نیز به دام افتاده که می­توانند با اثر بر سوبسترای

رنگزا وجود  lgM ضد روبلا را به اثبات برسانند.

محدوده طبیعی: جذب نوری نمونه­ هایی که کمتر از cut off است منفی و نمونه ­هائی

که جذب نوری آن­ها بیشتر از cut off است مثبت تلقی می­شود٬

حد مرزی افتراق موارد مثبت از منفی در روش­های کیفی به نام cut off value نامیده

می­شود و آن عبارت است از مجموع جذب نوری کنترل منفی و یک ضریب ثابت٬ که

ضریب ثابت خود بر اساس ±3SD میانگین جذب نوری نمونه­ های منفی توسط شرکت­ های تولید کننده محاسبه شده است.

نمونه: سرم تازه یا پلاسما که حداکثر به مدت 1 هفته در 8 – 2 درجه سانتی گراد و یا

در 20- درجه به مدت طولانی ­تر قابل نگهداری است.

همچنین ببینید

آنتی بادی هتروفیل ( جهت تشخیص ویروس اپشتاین بار)

جستجوی آنتی بادی هتروفیل ( آزمایش پول – بونل) ( Heterophil Paul bunell EBV tEST) …

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *