خانه > مقالات بخش خون شناسی > جنبه‌های عملی و اصول کالیبراسیون الکتروفورز3

جنبه‌های عملی و اصول کالیبراسیون الکتروفورز3

رنگ‌آمیزی (Staining)

معمولاً در این مرحله اشتباه یا خطائی صورت نمی‌گیرد. امّا بیدقتی و عدم درک درست از مکانیسم عمل می‌تواند ایجاد اشکال کند. باید توجه داشت که پروتئین‌های با غلظت بالا، مانند آلبومین در مقابل پروتئین‌های با غلظت کم مانند گلبولین، زمان بیشتری را برای رنگ‌آمیزی نیاز دارند. چرا که ممکن است عمل رنگ‌آمیزی گلبولین‌ها تماماً صورت گرفته باشد ولی آلبومین‌ها هنوز کاملاً رنگ نشده باشند. بنابراین تقریباً در همه روش‌های رنگ‌آمیزی، میزان لازم برای رنگ‌آمیزی[1] قبلاً اندازه‌گیری شده و در اختیار آزمایشگاه‌ها قرار داده می‌شود.

و: شفاف کردن (Clecureling)

از مزایای محیط‌های پایه ژلی (ژل آگارز یا ژل پلی‌اکریل‌آمید) این است که در حالت طبیعی شفاف بوده لذا نیازی به شفاف کردن ندارند. استات سلولز نیز به شکل محلول شفاف است اما ساختمان سلولوتیک استات سلولزی که برای الکتروفورز به کار می‌رود شفاف نیست. این ساختمان از میلیون‌ها  لایه که دارای ضریب شکست نور می‌باشند تشکیل شده و ظاهراً سفید و کدر به نظر می‌رسد.

ضریب شکست نور برای استات سلولز 47/1 می‌باشد. استات سلولز به کمک محلول‌هایی با ضریب شکست نزدیک به 47/1 شفاف می‌شود. در ابتدا یکی از روش‌های معمولی برای شفاف کردن نوار استات سلولز، خیساندن آن در روغن بود. روش دیگر شفاف کردن نوارهای استات سلولز، تخریب ساختمان آمورفیک و پر از منفذ آن می‌باشد. این عمل ممکن است با قرار دادن نوار استات سلولز در حلال‌های استات سلولز مانند اسید استیک گلاسیال صورت گیرد. تنها مشکل موجود، شفاف کردن نوار بدون ایجاد عوامل مزاحم یا آرتیفکت[2] در سطح نوار می‌باشد. بیشتر محلول‌های شفاف کننده از دو سیستم حلال تشکیل شده‌اند.

۱- حلال فعال[3] یا محلول حل کننده استات سلولز

۲- حلال حامل[4]

معمولاً قدرت تبخیری حلال فعال از حلال حامل کمتر است. حلال حامل با رقیق کردن حلال فعال، شرایطی را فراهم می‌نماید تا فرآیند حل شدن ساختمان استات سلولز توسط حلال فعال به آرامی صورت گیرد.

هنگامی که نوار استات سلولز در داخل مخلوطی از این دو حلال قرار داده می‌شود در ابتدا واکنشی دیده نمی‌شود ولی وقتی که نوار استات سلولز از حلال بیرون آورده می‌شود، با شروع تبخیر، فرآیند شفاف سازی نیز شروع می‌گردد. هم زمان با آغاز تبخیر حلال حمل کننده، حلال فعال در محیط عمل باقی مانده و غلظت آن افزایش می‌یابد و همگام با آن به تدریج ساختمان استات سلولز را حل کرده و نوار را شفاف می‌کند. بنابراین وقتی که نوار استات سلولز را در محلول شفاف کننده قرار می‌دهید، نباید منتظر شفاف شدن آن باشید بلکه باید آن را از محلول خارج ساخته و سپس منتظر شفاف شدن آن شوید. با این عمل از حرکت ناخواسته باندهای الکتروفورز بر روی نوار نیز جلوگیری خواهد شد.

[1]– Bound dye

[2]– Artifact

[3]– Active Solvent

[4]– Carrier Solvent

درباره‌ی تیم ورود داده

همچنین ببینید

اصول اندازه گیری ESR

اصول اندازه گیری ESR نور مادون قرمز در طول لوله سدیمان حرکت کرده ، ابتدا …

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *