روش ساخت DNA- چیپها

روش ساخت DNA- چیپها: در ساخت DNA چیپها به کمک تکنولوژی فتولیتوگرافی، ابتدا اسلایدهای کوچک شیشه‌ای، با لایه‌ای از ماده‌ای مخصوص بنام ماده اتصال دهنده(Linker)  پوشانده می‌شوند. سپس با تاباندن پرتوهای لامپ جیوه به ماده مزبور، آنرا فعال نموده و آماده اتصال شیمیایی با نوکلئوزیدها می‌نمایند. در مسیر این پرتوها یک ماسک لیتوگرافی قرار دارد که منافذ آن به کمک کامپیوتر کنترل می‌شود و در اثر آن، پرتوها بطور انتخابی، به نواحی دلخواه روی صفحه تابانده می‌شوند. در این هنگام یک...
ادامه مطلب

مراحل مختلف LCR

مراحل مختلف LCR آنالیز LCR شامل سه مرحله است: الف – تهیه و آماده‌سازی نمونه (Sample Preperation): این مرحله متناسب با اهداف و نمونه‌های مورد نظر براساس توصیه‌های سازنده کیت و پروتکل پیشنهادی آن صورت می‌گیرد. ب – تکثیر DNA به روش LCR (LCR Amplification): چهار پرایمر منحصر بفرد تهیه شده از مناطق بسیار حفاظت شده به علاوه بافر، نوکلئوتیدها، ATP ، DNA پلیمراز و DNA لیگاز مقاوم به حرارت (براساس کیت و شرکت سازنده و اهداف مورد نظر، مقادیر آن تغییر می‌کند) برای فرآیند تکثیر به همراه کنترل‌های...
ادامه مطلب
برچسب ها:

NCCLS- واکنش زنجیره ای لیگاز LCR (Ligase Chain Reaction)

NCCLS- واکنش زنجیره­ای لیگاز (LCR (Ligase Chain Reaction مقدمه گسترش دانش و فن­آوری در زمینۀ ژنتیک ملکولی، DNA نوترکیب و مهندسی ژنتیک، روز به روز حوزه­ های جدیدی را فراروی محققان و پژوهشگران قرار می­دهد. در این میان ابزار و فن­آوری جدید به عنوان شاه­ کلید گشایش روزنه­ های امید برای حل مشکلات جدی در دنیای امروز محسوب می­شود. فن­آوری ­هایی نظیر PCR، RFLP، انگشت نگاریDNA  و ژن کلونینگ در علوم مختلف زیستی، بیوتکنولوژی، صنعت و پزشکی جایگاه ویژه­ای دارند و بنا به نیاز، محققان در صدد ابداع...
ادامه مطلب

چگونگی از آلودگی حذر نمود

چگونگی از آلودگی حذر نمود منابع بالقوه آلودگی زیادی قبل از انجام PCR وجود دارد که در این تکنیک حساس خود را نمایان می­نماید. برای مثال اگر نمونه­ های کلینیکی به کار رود روشهای مناسب جهت جمع­ آوری و نگهداری نمونه باید اتخاذ گردد. منشاء DNA آلوده کننده می­تواند سلولهای پوست یا موی افراد، سطوح آزمایشگاه و بسیاری چیزهای دیگر باشو. آلودگیهای قابل انتقال از طریق هوا یکی دیگر از علتهای آلودگی نمونه ­ها است. واکنشگرها و اجزاء مورد استفاه از PCR یا مراحلی که در استخراج و تهیه DNA...
ادامه مطلب
برچسب ها:

تکثیر محصول صحیح

تکثیر محصول صحیح همانطور که دیده شد بازده و ویژگی PCR بوسیله فاکتورهای مختلفی تحت تاثیر قرار می‌گیرد . کیفیت DNA الگو ،طراحی پرایمرها و شرایط PCR مانند غلظت ، DNA پلیمر از شرایط بافری ، همه و همه در بازده و ویژگی تاثیرگذار هستند .برخی از عوامل مهم در جدول (۹) آمده است. جدول (۱۰): پارامترهای مهم و تأثیرگذار در بهینه نمودن PCR -پروفایل حرارتی PCR (چسبیدن پرایمر، پلیمریزایسیون، دناتوراسیون،زمان افزایش و کاهش حرارتی ، و تعدادسیکلها) -غلظت یون منیزیوم -طراحی پرایمر و غلظت...
ادامه مطلب

نشاندار کردن پرایمر

نشاندار کردن پرایمر محصول PCR را می‌توان از طریق پرایمرها در واکنش تکثیری نشاندار نمود. پرایمرها را می‌توان بطور آنزیماتیک با ۳۲P بوسیله انکوباسیون با [y-p32]dATP و با استفاده از T4 پلی‌نوکلئوتید کیناز نشاندار نمود. محصول PCR را می‌توان به آسانی آشکار نمود و همینطور جهت تعیین ترادف مستقیم بوسیله روش ماکسام و گیلبرت، سنجش‌های DNA Protein binding/Protection، انگشت‌نگاری ژنتیکی یا آنالیز پلی‌مورفیسم شکلی تک رشته (SSCP) مورد استفاده قرار داد. پرایمرهای PCR را می‌توان از انتهای ′۵...
ادامه مطلب

پرایمرها، طراحی و تعیین غلظت

پرایمرها، طراحی و تعیین غلظت در واکنش PCR پرایمرها در دو طرف سکانس هدف اتصال می‌یابند و امکان شروع فعالیت پلیمرازی آنزیم DNA پلیمراز را فراهم می‌آورند. بنابراین اولین خصوصیت پرایمر، سکانس صحیح آن جهت مکان مورد نظر برای تکثیر است. با در دسترس بودن سکانس هدف  امکان مشخص نمودن سکانس پرایمر فراهم می‌آید و سپس باید اندازه آنها را مشخص نمود زیرا موضوع مهم که با طول پرایمرها در ارتباط نزدیک است اجتناب از اتصال پرایمر با مناطق غیرهدف و هم‌چنین با مولکولهای دیگر DNA...
ادامه مطلب

دیگر واکنشگرهای PCR داکسی نوکلئوزیدتری فسفات (dNTPs)

دیگر واکنشگرهای PCR داکسی نوکلئوزیدتری فسفات (dNTPs) یک PCR بطور طبیعی با غلظت حدود ۱۰۰ میکرومول از dNTP انجام می‌شود اگر چه در غلظت‌های پایین‌تر dNTP یعنی ۱۰۰-۱۰ میکرومول، آنزیم Taq دارای صحت بالاتری است با این وجود، غلظت بهینه dNTPها بستگی دارد به : غلظت MgCl2 – سختی واکنش – غلظت پرایمر – طول محصول تکثیرشونده – تعداد سیکلهای PCR جهت بهینه نمودن یک PCR ضروری است که بهترین غلظت dNTP، بطور تجربی تعیین شود. می‌توان انواع نوکلئوتیدهای تغییر یافته را از طریق به کار بردن آنالوگ‌های dNTP و...
ادامه مطلب

پروفایل حرارتی سیکلهای PCR

پروفایل حرارتی سیکلهای PCR مرحله اول: DNA دو رشته‌ای در اثر حرارت در حضور پرایمرها، چهار dNTP و DNA پلیمراز مقاوم به حرارت باز می‌شود. دناتوراسیون حرارتی بطور معمول در طیف دمایی C̊۱۰۰-۹۳ انجام می‌شود. مرحله دوم: پرایمرهای الیگونوکلئوتیدی به هدف دناتوره شده از طریق کاهش دما به C ̊۶۵-۳۷ (بسته به Tm پرایمرهای الیگونوکلئوتیدی) می‌چسبند. مرحله سوم: آنزیم DNA پلیمراز مقاوم حرارت بدنبال پرایمرها و با استفاده از سکانس هدف، عمل پلیمریزاسیون را در C ̊۷۲ انجام می‌دهد. سپس این...
ادامه مطلب

ضمیمه تومورمارکرها

ضمیمه تومورمارکرها سایر تومورها مارکرهائیکه قابل سنجش هستند و فقط به اختصار نام برده می‌شوند: ۱- CA-So و ۱۹-۵: برای سنجش کارسینوماهای مختلف ۲- Oncoprotion (HER-2/Ncu) C-erb-2: کانسر پستان و تخمدان ۳- Chromogranin A: از مدولای آدرنال، فئوکروموسیتوما و کارسینومای سلولهای کوچک ریه ۴- CYFRA 21-1: از Cytokeratin 19 موجود در سرم مشتق می‌شود. تشخیص افتراقی کارسینومای Squamous Ccu از سرطان ریه ۵- Cyclins: برای بررسی مراحل مختلف تقسیم سلولی (در بررسی پرولیفراسیون بافتی) و کانسرها ۶- رستپورهای پروژسترون و استروژن: ER و PR ۷-...
ادامه مطلب
برچسب ها:


دانلود اپلیکیشن اندروید پارامد پارامد-اپلیکیشن رد کردن